6362La Calera1998-8850Universidad Nacional AgrariaNicaragualacalera@ci.una.edu.ni10.5377/calera.v18i30.7737Producción de PlantasDetección molecular de Candidatus liberibacter solanacearum (Zebra Chip) en papa (Solanum tuberosum L,) en NicaraguaMolecular detection of Candidatus liberibacter solanacearum (Zebra Chip)
in patato (Solanum tuberosum L,) in NicaraguaRamírez DuránJenifer Bermania1Zamora JarquínAndrea2andrea.zamora0301@gmail.comhttp://orcid.org/0000-0002-6604-1660Sánchez GómezIsaías3isanchez@ci.una.edu.nihttp://orcid.org/0000-0002-7904-8853Blandón DíazJorge Ulises4ulisesdb@ci.una.edu.niUniversidad Nacional Agraria, NicaraguaUniversidad Nacional AgrariaNicaraguaInstituto Nicaragüense de Tecnología
Agropecuaria, NicaraguaInstituto Nicaragüense de Tecnología
AgropecuariaNicaraguaUniversidad Nacional Agraria, NicaraguaUniversidad Nacional AgrariaNicaraguaUniversidad Nacional Agraria, NicaraguaUniversidad Nacional AgrariaNicaragua
En el cultivo de papa se han registrado diversos problemas fitosanitarios importantes por la presencia de virus, bacterias y hongos. En los últimos años, productores de los departamentos de Estelí y Jinotega han reportado plantas con síntomas de la enfermedad Zebra chip ocasionada por la bacteria fastidiosa Candidatus liberibacter solanacearum. La enfermedad Zebra chip ha causado grandes pérdidas económicas a los productores de papa del país donde la producción se desarrolla todo el año. Ante esta problemática el Instituto Nicaragüense de tecnología Agropecuaria (INTA) junto con la Universidad Nacional Agraria (UNA) realizó un estudio comprendido entre los meses de agosto 2015 a Julio 2016 con el objetivo de generar información relacionada a la presencia y distribución de Ca. L. solanacearum en los departamentos mencionados. Se colectaron 162 muestras de tejidos con síntomas de la enfermedad en cuatro localidades de Jinotega y tres localidades de Estelí durante los tres ciclos de siembra del cultivo. Las muestras de tejido fueron procesadas y analizadas en el Centro Nacional de Investigación Agropecuaria y Biotecnología (CNIA-INTA) para detectar el agente causal Ca.l. solanacearum utilizando los cebadores moleculares ligados a la bacteria Lso Tx 16/23 y al gen de limpieza Lso adk. 50 muestras resultaron positivas con el cebador Lso Tx 16/23 indicando alta especificidad para la detección de este patógeno, mientras que con los cebadores Lso ADK 42 muestras fueron positivas presentando polimorfismos. Se detectó la bacteria en las zonas de El Tayacán y El Zacatón en el departamento de Estelí y en el departamento de Jinotega El Mojón, La Palmera y San Gregorio. El mayor porcentaje de afectación por Ca. L. solanacearum se presentó en Jinotega con un 52.17% en comparación con Estelí que presento un 22.41% de las muestras colectadas.
Abstract
Several important phytosanitary
problems have been recorded in potato cultivation due to the presence of viruses,
bacteria and fungi. In recent years, producers in the departments of Estelí
and Jinotega have reported plants with symptoms of the Zebra disease chip
caused by the fastidiosa bacterium Candidatus liberibacter solanacearum. The
Zebra chip disease has caused large economic losses to potato producers in
the country where the production is developed all year. Faced with this
problem, the Nicaraguan Institute of Agricultural Technology (INTA), together
with the National Agrarian University (UNA), conducted a study between August
2015 and July 2016 with the objective of generating information related to
the presence and distribution of Ca. Solanacearum in the above mentioned
departments. A total of 162 tissue samples with disease symptoms were
collected from four locations in Jinotega and three locations in Estelí
during the three cropping cycles. Tissue samples were processed and analyzed
at the National Center for Agricultural Research and Biotechnology
(CNIA-INTA) to detect causative agent Ca.l. Solanacearum using the molecular
primers bound to the bacterium Lso Tx 16/23 and the cleansing gene Lso adk.
50 samples were positive with the Lso Tx 16/23 primer indicating high
specificity for the detection of this pathogen, whereas with the Lso ADK
primers 42 samples were positive presenting polymorphisms. The bacterium was
detected in the areas of El Tayacán and El Zacatón in the department of
Estelí and in the department of Jinotega El Mojón, La Palmera and San
Gregorio. The highest percentage of affection for Ca. L. solanacearum was
presented in Jinotega with 52.17% compared to Estelí that presented 22.41% of
the samples collected.
La papa es el cuarto
cultivo sembrado en más de cien países, siendo el alimento básico de los
países desarrollados (Europa y Estados Unidos), quienes consumen 75 kg per
cápita anuales. La importancia de la papa radica en que sus tubérculos son
parte de la dieta de millones de personas a nivel mundial ya que contiene 80%
de agua y la materia seca está constituida por carbohidratos, proteínas,
celulosa, minerales, vitaminas A y C que proporcionan una dieta balanceada
(INTA, 2004). La papa se cultiva únicamente en elevaciones que oscilan entre
700 a 1,300 msnm con temperaturas promedio de 18°C lo que la hace apta para
su buen desarrollo (FUNICA, 2007).
En Nicaragua, la papa representa un cultivo de mucha importancia después de
los granos básicos y se cultiva en climas templados de Estelí, Jinotega y
Matagalpa. El consumo per cápita en nuestro país es de 8 kg anuales. Se
siembran entre 800-1200 ha con una producción que satisface el 35-40% de la
demanda nacional (INTA, 2004). El país importa de 30–40% de papa fresca y
100% de tubérculo-semilla para cubrir la demanda del mercado (FUNICA, 2007).
Entre los factores que limitan la producción de papa en Nicaragua se pueden
citar la escasez de semilla, el alto costo, la baja calidad de tubérculos por
la proliferación de enfermedades y el costo de la aplicación obligatoria de agroquímicos
para el control de plagas y enfermedades (INTA, 2004).
Desde el comienzo del año 2011 en las plantaciones de papa de Nicaragua se
observó sintomatología de la enfermedad zebra chip causada por la bacteria
fastidiosa Ca. l solanacearum y con ella la presencia prolífera del insecto
Bactericera cockerelli este insecto al alimentarse de la planta le transmite
la bacteria causante de la enfermedad (Toledo, 2011). Para este entonces la
enfermedad había sido reportada en otros países tales México (Leyva-Lopez et
al., 2002, Martínez-Soriano et al., 1999), Estados Unidos (Banttari et al.,
1990, Lee et al., 2009), Canadá (Khadhair et al., 1997; Khadhair &
McAllister, 2003), Bolivia (Jones et al., 2005), Rusia (Girsova et al.,
2008), Australia (Harding & Teakle, 1985), Korea (Jung et al., 2003), y
Nueva Zelanda (Liefting et al., 2009). En Nicaragua no hay reportes
cuantificables de las pérdidas a causa de la enfermedad Zebra chip que está
asociada a la papa, pero las plantaciones han sido gravemente infectadas al
punto de reportarse pérdidas totales. Según Gutiérrez et al.; (2013) en
México la producción de papa ha sufrido pérdidas económicas de 70% a 90%
causado por esta enfermedad.
Ca. Liberibacter solanacearum es una bacteria que se aloja en los tubos cribosos
del floema y afecta a distintos cultivos pertenecientes a la familia de las
rutáceas, solanáceas y apiáceae. A través de estudios filogenéticos de la
región 16S rRNA se ha encontrado que Ca. L. solanacearum pertenece a las
α-proteobacterias y está muy relacionada a 4 especies de Candidatus
liberibacter: Ca. L. asiaticus, Ca. L. africanus, Ca. L. americanus y Ca. L.
europaeus. Es una bacteria Gram negativa y logra su desarrollo óptimo entre
27-32°C (Camacho y Tapia et al., 2016). Esta enfermedad está caracterizada
por los síntomas de amarillamiento, clorosis con los bordes de las hojas
moradas, achaparramiento de la planta, abultamiento del tallos en lugares de
inserción, formación de tubérculos aéreos (Hernández, 2012), también
numerosos tubérculos pequeños mal formados y de mala calidad, retraso del
crecimiento de la planta, rotación ascendentes de hojas, entrenudos acortados
y la proliferación de brotes axilares y en los tubérculos se observa
decoloración y un ligero rayado oscuro, y cuando se fríen las rayas son más
dominantes afectando también el sabor lo que hace que lo hace comercialmente
inaceptable (Munyaneza, 2012).
Las técnicas moleculares para la detección de hongos y virus se han
implementado recientemente en Nicaragua en cultivos de frijol, tomate, cacao
y papa. Sin embargo, las bacterias fastidiosas como patógenas no han sido de
mucha importancia en cultivos agrícolas. Es importante para los productores y
gobierno confirmar si los síntomas pertenecen Zebra, por tanto este primer
estudio tiene por objetivo detectar la presencia y distribución de Candidatus
Liberibacter solanacearum agente causal de la enfermedad Zebra chip en el
cultivo de papa, en los departamentos de Jinotega y Estelí, mediante la
técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en
inglés)
<bold>MATERIALES Y MÉTODOS</bold>
<bold>Ubicación y periodo del estudio</bold>
La
investigación se realizó en el (CNIA-INTA), ubicado en el departamento de
Managua, km 14.1 carretera norte, 3 km hacia el sur. Localizado entre la
Latitud: 12°08’36” N y Longitud: 86°09’49” W, con una elevación de 56 msnm en
el departamento de Managua. Este trabajo se realizó durante los meses de
agosto 2015 a julio 2016.
<bold>Recolección de muestras.</bold>
Se colectaron 162 muestras de tejido con
síntomas característicos de la enfermedad en cuatro localidades del
departamento de Jinotega y tres en el departamento de Estelí en los periodos
de primera, postrera y apante. Las variedades de papa presentes en las zonas
de muestreo fueron: Granola, Desiree, Calwhite, Silvana, Picaso, Provento,
Toluca, Punta roja, Ronaldo, Monte Carlo. Cada uno de los sitios de donde se
recolectaron las muestras fue geo-referenciado mediante un dispositivo de
Sistema de posicionamiento global (GPS). Se recolectaron muestras que
presentaban los síntomas característicos de la enfermedad, los cuales
consistían en: amarillamiento, clorosis con los bordes de las hojas moradas,
achaparramiento de la planta, abultamiento de los tallos en lugares de
inserción, formación de tubérculos aéreos, decoloración en los tubérculos con
forma de rayado ligero. Las muestras se colocaron en bolsas de papel y bolsas
plásticas con cierre hermético dentro de una hielera para ser trasladadas al
laboratorio y fueron almacenadas a -20°C para después proceder a extraer ADN.
<bold>Extracción de ADN.</bold>
Para la extracción de ADN se utilizó el método
descrito por Dallaporta et al., (1983) con algunas modificaciones. Por cada
genotipo se tomó 5 mg de tejido vegetal y se colocó en un tubo eppendorf (1.5
ml). Se agregó buffer de extracción Tris- HCL 100 mM, EDTA 50 mM, NaCl 500 mM
y 2-mercaptoetanol 20 mM a cada muestra y luego se maceró el tejido usando
pistilos plásticos estériles hasta homogenizar las muestras. Seguidamente, se
agregó sulfato dodecil sódico (SDS) al 10% y se colocaron las muestras en
incubadora tipo baño María a 65°C por 10 minutos agitándola por lo menos tres
veces. Se adicionó acetato de potasio (3M) a cada muestra para incubarse a
menos 20°C por 20 minutos, posteriormente las muestras se centrifugaron a
15,000 rpm por 15 minutos a 5°C. Se extrajo el sobrenadante y se transfirió a
un tubo eppendorf estéril y se procedió a agregar y mezclar 0.6 volúmenes de
2-propanol helado, se conservaron las muestras a menos 20°C por 20 minutos y
las muestras se volvieron a centrifugar a 15,000 rpm por 15 minutos a 5°C. Se
procedió a extraer el 2-propanol volteando el tubo rápidamente, luego se lavó
dos veces el pellet en etanol al 70% a 15,000 rpm a 5°C por 5 minutos, se
secaron los pellets de ADN a temperatura ambiente por 50 minutos. Los pellets
de ADN se re disolvieron en buffer TE 1 X (conteniendo Tris- HCL (100 mM) pH
8.0 y EDTA (1 mM) y se conservaron las muestras a menos 20°C para su
posterior utilización.
Identificación molecular de Candidatus liberibacter solanacearum. La
amplificación PCR realizada con los cebadores Lso adk fue a un volumen final
de 20 µl utilizando 5 µM del cebador delantero y reverso (Lso adk F
5’-GCGCCACACTAACATCTCCTTCC-3´y Lso adk R 5’-CGCAGCAGTATGAGGGCC-3´), 1X de
buffer, 200 µM de cada dNTPs (10 Mm) y 0.02 U/µl de Taq polimerasa, agua
libre de nucleasas y ADN. El desarrollo de la PCR se realizó en un
termociclador Eppendorf bajo las siguientes condiciones: desnaturalización
inicial 30 segundos a 98°C, seguido de 40 ciclos a 98°C por 10 segundos, 60°C
por 20 segundos, 72°C por 30 segundos y una extensión final a 72°C por 7
minutos.
En el caso de la amplificación PCR realizada con los cebadores Lso TX 16/23
fue a un volumen final de 20 µl utilizando 10 pmol del cebador delantero y
reverso (Lso TX 16/23 F (5´- AATTTTAGCAAGTTCTAAGGG-3´ y R Lso TX 16/23
5´-GGTACCTCCCATACGC-3´), Go taq colorless master mix 2X, agua libre de
nucleasas y ADN. El desarrollo de la PCR se realizó en un termociclador
Eppendorf bajo las siguientes condiciones: desnaturalización inicial 30
segundos a 98°C, seguido de 40 ciclos a 98°C por 10 segundos. 55°C por 20
segundos, 72°C por 30 segundos y una extensión final a 72 °C por 7 minutos
(Ravindran et al., 2011)
En ambos productos PCR, se visualizaron los resultados colocando 20 ul de las
muestras con 4 ul de 6X loading Dye en un gel de agarosa al 1.2% que fue
teñida con bromuro de etidium antes de solidificar, el gel se colocó en una
cámara de electroforesis con buffer TBE 0.5X se corrió durante 90 min a 90
voltios, y se colocó en un transluminador para verificar la presencia o
ausencia de la bacteria en las muestras y se registró mediante fotografía. Se
consideraron muestras positivas a las que tuvieron una amplificación de
fragmentos de acuerdo a los cebadores utilizados Lso TX 16/23 que amplifica a
383 pb y Lso adk que amplifica a 770 pb.
Distribución geográfica de Candidatus liberibacter solanacearum. La
determinación de la distribución geográfica, se geo referencio mediante un
dispositivo de sistema de posicionamiento global (GPS). Tomando los puntos en
las plantas con síntomas característicos de la enfermedad.
<bold>RESULTADOS Y DISCUSIÓN</bold>
Presencia de Candidatus liberibacter
solanacearum con los cebadores Lso TX 16/23. Se procesaron 162
muestras de tejido con síntomas de la enfermedad punta morada y mediante la
PCR se detectaron 50 muestras infectadas con Ca Liberibacter solanacearum con
el cebador Lso Tx 16/23, representando el 30.88% de muestras colectadas en
los departamentos de Estelí y Jinotega en los tres ciclos del cultivo. Los
mayores porcentaje de muestras positivas se observaron en postrera (9.25%) en
el departamento de Estelí y 8.02% en primera en el departamento de Jinotega.
El cebador Lso TX 16/23 amplificó un fragmento de 383 pb el correspondiente
para detectar Ca. Liberibacte solanacearum (figura 1). Los resultados fueron
similares a los obtenidos por Ravindran et al., (2011), obteniendo
amplificados de 383 pb de la región 16S y 23S rDNA para Ca. L. solanacearum
en el cultivo de la papa. Por otro lado, se han realizado otros estudios de
detección de Ca. L. solanacearum en los cultivos de apio y perejil utilizando
el marcador Lso TX 16/23 obteniéndose como resultado una alta sensibilidad y
especificidad en detección, superando a los marcadores OA2 y OI2c, que son
utilizados comúnmente para la detección y diagnóstico de Ca. L. solanacearum
(Teresani et al., 2014; Monger y Jeffries, 2016).
Resultados positivos con cebadores Lso Tx 16/23 (383pb) en muestras de tejido con síntomas de enfermedad (1-9)
Control positivo (C+) y control negativo (c-)
Figura 1. Resultados positivos con cebadores Lso Tx 16/23 (383pb) en muestras de tejido con síntomas de enfermedad (1-9)
Un segundo marcador fue utilizado para
la detección de ‘Ca. L. solanacearum. El marcador Lso adk proviene del gen de
limpieza adk (housekeeping gene adk) de secuencias alineadas de Ca. L.
solanacearum y asiaticus (Ravindran et al., 2011). Un total de 72 muestras de
tejido infectado con zebra chip fue utilizado para la detección con el
marcador Lso adk obteniendo como resultado 42 muestras positivas,
observándose fragmentos de 383, 500 y 770 pb. (figura 2). Los resultados se
compararon con los obtenidos por Ravindran et al., (2011) encontrando
similitud en 9 muestras con una sola banda de 770 pb. Sin embargo, la
presencia de fragmentos polimórficos con el marcador Lso adk no fue reportado
en el estudio de Ravindra et al., 2011 y 2012. De acuerdo a Glynn et al.,
2012; los genes de limpieza son generalmente utilizados como tipo de
secuencia multilocus (MLST) debido a que experimentan variaciones relativas
en la secuencia entre los loci lo cual refleja adaptación de los patógenos y
son informativos para identificar grupos entre una población dada.
Productos PCR amplificados a 77 pb con los cebadores Lso adk. (C+) indica control positivo (C-) control negativo.
Los números del 7 al 13 corresponden a las muestras colectadas con síntomas característicos de la enfermedad.
Figura 2. Productos PCR amplificados a 77 pb con los cebadores Lso adk. (C+) indica control positivo (C-) control negativo.
Distribución geográfica de Candidatus
liberibacter solanacearum (CLs). La distribución geográfica se
basa fundamentalmente en los informes recolectados de la presencia de
Bactericera cockerelli quien transmite la bacteria Candidatus liberibacter
solanacearum (MAG Costa Rica, 2010). Mediante los resultados obtenidos de la
PCR, que se realizó en muestras colectadas con síntomas de la enfermedad en
los departamentos de Jinotega y Estelí se detectó la presencia de Candidatus
liberibacter solanacarum en El Tayacán y El Zacatón en el departamento de
Estelí, mientras en que el departamento de Jinotega en las zonas del Mojón,
La Palmera y San Gregorio.
Localidades de los departamentos de Estelí y Jinotega con resultados positivos mediante la técnica PCR para Candidatus Liberibacter Solanacearum (Puntos negros en el mapa)
Figura 3. Localidades de los departamentos de Estelí y Jinotega con resultados positivos mediante la técnica PCR para Candidatus Liberibacter Solanacearum (Puntos negros en el mapa)
Los síntomas de la enfermedad se
registraron por primera vez en los campos comerciales de Texas, México en
1994 y ha sido reportada en California, Colorado, Kansas, Nebraska, Nevada y
Nuevo México suroeste de Estados Unidos en el 2000, también se registró la
presencia en Guatemala, Honduras y Nicaragua en el 2010; en el 2008 se encontró
que la bacteria estaba afectado los cultivos en nueva Zelanda, Finlandia,
Noruega y Suecia (Secor et al 2009; Munyaneza et al., 2012).
La presencia de Candidatus liberibacter solanacearum en los campos de papa
esta correlacionados con la presencia del insecto vector Bactericera
cockerelli el cual tiene un rango óptimo de temperatura 21-27°C, mientras que
las temperatura superiores a 32°C perjudica la ovoposición y eclosión de B.
cockerelli (OIRSA, 2015). La altura promedio en el departamento de Estelí es
de 900-1500 msnm, mientras que en Jinotega altura promedio oscila entre
700-1700 msnm, según Rubio et al., (2011) la población de B. cockerelli
disminuye con la altura, por tanto a alturas mayores de 3200 msnm no se
presentan daños significativos económicamente.
<bold>CONCLUSIONES</bold>
Se confirmó la presencia de Ca. l.
solanacearum en los campos de papa en los departamentos de Estelí y Jinotega,
resultando ser más específico el marcador Lso TX 16/23 F/R para detectar ‘Ca.
l. solanacearum. Las zonas con presencia de la bacteria fueron El Tayacán y
El Zacatón en el departamento de Estelí y en el departamento de Jinotega en
las zonas del Mojón, La Palmera y San Gregorio. Se sugiere realizar estudios
adicionales de Ca l. solanacearum en cultivos que no están relacionados con
las solanáceas como pe ejil, zanahoria, apio y otras hortalizas de altura
debido a que se ha reportado la presencia de este patógeno en otros países
infectando estos cultivos.
Agradecimientos
Se agradece el apoyo financiero de las
autoridades CNIA-INTA para la realización de este estudio.
ReferenciasBanttari, EE., Orr, PH; Preston, DA.
1990. Purple top as acause of potato chip discoloration. Trans ASAE
33:221–226. BanttariEEOrrPHPrestonDAPurple top as acause of potato chip discolorationTrans ASAE199033221226Camacho Tapia, M; Rojas Martínez, RI; Zavaleta Mejía, E; Rebollar Alviter, A;
Aranda Ocampo, S; Suárez Espinosa, J. 2016. Biological, ecological,
epidemiological and management aspects of Candidatus Liberibacter. Revista
Chapingo serie horticultura. 12. (1). 5-16p. Camacho TapiaMRojas MartínezRIZavaleta MejíaERebollar AlviterAAranda OcampoSSuárez EspinosaJBiological, ecological,
epidemiological and management aspects of Candidatus Liberibacter.Revista Chapingo serie horticultura2016121516Dallaporta, SJ; Wood, J; Hicks, JB. 1983. A plant DNA minipreparation:
version II. Plant Molecular Reporter 1:19-21 DallaportaSJWoodJHicksJBA plant DNA minipreparation:
version IIPlant Molecular Reporter198311921FUNICA (Fundación para el Desarrollo Tecnológico Agropecuario y Forestal de
Nicaragua). 2007. Análisis de lacadena sub-sectorial de la papa para consumo.
Boletín FUNICA. FUNICA, Managua, Nicaragua 48 p.FUNICA (Fundación para el Desarrollo Tecnológico Agropecuario y Forestal de
Nicaragua)Análisis de lacadena sub-sectorial de la papa para consumo.Boletín FUNICA2007Managua, NicaraguaFUNICA48Girsova, N, Bottner, KD, Mozhaeva, KA; Kastalyeva, TB; Owens, RA; Lee, M.
2008. Molecular detection and identification of group 16SrI and 16SrXII
phytoplasmas associated with diseased potatoes in Russia. Plant Dis.
92:654. GirsovaNBottnerKDMozhaevaKAKastalyevaTBOwensRALeeMMolecular detection and identification of group 16SrI and 16SrXII
phytoplasmas associated with diseased potatoes in Russia.Plant Dis200892Glynn, J; Islam, M; Bai, Y; Lan, S; Wen, A, Gudmestad, N; Civerolo, E; Lin,
H. 2012. Multilocus sequence typing of ‘Candidatus liberibacter solanacearum’
isolates from North America and New Zealand. J. Plant Pathol.
94:223-228. GlynnJIslamMBaiYLanSWenAGudmestadNCiveroloELinHMultilocus sequence typing of ‘Candidatus liberibacter solanacearum’
isolates from North America and New Zealand.J. Plant Pathol201294223228Gutierrez, IAT; Sánchez, PJR; Laguna, CA; Ramírez, DJF; Balbuena, MA;
Alvarado, GOG. 2013. Detección de Ca liberibacter solanacerum y fitiplasma en
cultivo de papa (Solanum tuberosum L.) en el valle de Toluca. Colomb.
Biotecnol. 15(1):145-149. GutierrezIATSánchezPJRLagunaCARamírezDJFBalbuenaMAAlvaradoGOGDetección de Ca liberibacter solanacerum y fitiplasma en
cultivo de papa (Solanum tuberosum L.) en el valle de Toluca. ColombiaBiotecnol2013151145149Harding, RM; Teakle, DS. 1985. Mycoplasma-like organisms as causal agents of
potato purple top in Queensland. Aust. J. Agric. Res. 36:443-449. HardingRMTeakleDSMycoplasma-like organisms as causal agents of
potato purple top in Queensland. Aust.J. Agric. Res.198536443449Hernández, LS. 2012. Caracterización de las variedades de papa (Solanum
tuberosum L.) Utilizadas en el cofre de perote, Veracruz bajo régimen de
temporal. Xalapa, Enríquez Veracruz. Universidad Veracruzana Facultad de
Ciencias Agrícolas. 85p. HernándezLSCaracterización de las variedades de papa (Solanum tuberosum L.) Utilizadas en el cofre de perote, Veracruz bajo régimen de temporal. Xalapa, Enríquez Veracruz2012Universidad Veracruzana Facultad de Ciencias Agrícolas85INTA/NORAD Zona B-3. 2004. Programa MIP. Plegables sobre: como muestrear las
plagas de nuestros cultivos. INTANORAD Zona B-3Programa MIP. Plegables sobre: como muestrear las plagas de nuestros cultivos2004Jung, HY; Hahm, YI; Lee, JT. Hibi, T; Namba, S.
2003. Characterization of a phytoplasma associated with witches’- broom
disease of potatoes in Korea. J. Gen. Plant Pathol. 69:87-89. JungHYHahmYILeeJTHibiTNambaSCharacterization of a phytoplasma associated with witches’- broom
disease of potatoes in KoreaJ. Gen. Plant Pathol2003698789Khadhair, AH; McAllister, PD. 2003. Transmission and characterization of
phytoplasma diseases associated with infected potato cultivars in Alberta.
Acta Hortic. 169:167-176. KhadhairAHHirukiCHwangSFWangKMolecular identification
and relatedness of potato witches’-broom phytoplasma isolates from four
potato cultivars.Microbiol. Res1997152281286Lee, IM; Bottner, KD; Sun, M. 2009. An emerging potato purple top disease
associated with a new 16SrIII group phytoplasma in Montana. Plant Dis.
93:970 LeeIMBottnerKDSunMAn emerging potato purple top disease
associated with a new 16SrIII group phytoplasma in MontanaPlant Dis200993Leyva-López, NE; Ochoa-Sánchez, JC; Leal-Klevezas, DS; Martínez-Soriano, JP.
2002. Multiple phytoplasmas associated with potato diseases in Mexico. Can.
J. Microbiol. 48:1062-1068. Leyva-LópezNEOchoa-SánchezJCLeal-KlevezasDSMartínez-SorianoJPMultiple phytoplasmas associated with potato diseases in Mexico.Can. J. Microbiol20024810621068Liefting, LW; Veerakone, S; Ward, LI; Clover G, RG. 2009. First report of
Candidatus Phytoplasma australiense’ in potato. Plant Dis. 93:969LieftingLWVeerakoneSWardLIClover GRGFirst report of
Candidatus Phytoplasma australiense’ in potatoPlant Dis200993MAG Costa Rica. 2010. SFE desarrolla Plan de Acción ante la cercanía de la
Paratrioza (Bactericera cockerelli Sulc.) Costa Rica. No 45. 4p. MAG Costa Rica.SFE desarrolla Plan de Acción ante la cercanía de la
Paratrioza (Bactericera cockerelli Sulc.)Actualidad Fitosanitaria201045Costa Rica4Martínez-Soriano, JP; Leyva-López, NE; Zavala-Soto, ME; Berès, M;
Leal-Klevezas, DS. 1999. Detección molecular del agente causal del síndrome
“bola de hilo” de la papa en semillas infectadas y asintomáticas. Biotecnol.
Apl. 16:93-96. Martínez-SorianoJPLeyva-LópezNEZavala-SotoMEBerèsMLeal-KlevezasDSDetección molecular del agente causal del síndrome
“bola de hilo” de la papa en semillas infectadas y asintomáticas.Biotecnol.1999169396Monger, WA; Jeffries, CJ. 2016. First report of ‘Candidatus Liberibacter
solanacearum’ in parsley (Petroselinum crispum) seed. New Disease Reports.
34. 31. MongerWAJeffriesCJFirst report of ‘Candidatus Liberibacter
solanacearum’ in parsley (Petroselinum crispum) seed.New Disease Reports2016Munyaneza Joseph, E. 2012. Zebra Chip Disease of potato Biology,
Epidemiology, and Management. Publications from USDA AR. MunyanezaJoseph, EZebra Chip Disease of potato Biology,
Epidemiology, and ManagementAmerican Journal of Potato Research2012OIRSA (Organismo Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria). 2015. El
psílido de la papa y tomate bactericera (=Paratrioza) cockerelli (Sulc)
(Hemiptera: Triozidae): ciclo biológico; la relación con las enfermedades de
las plantas y la estrategia del manejo integrado de plagas en la región del
OIRSA. Mexico D.F. Ed. Tauro S.A. OIRSA (Organismo Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria).El psílido de la papa y tomate bactericera (=Paratrioza) cockerelli (Sulc) (Hemiptera: Triozidae): ciclo biológico; la relación con las enfermedades de las plantas y la estrategia del manejo integrado de plagas en la región del OIRSA2015Mexico D.FEd. Tauro S.A.Ravindran, A; Levy, J; Pierson, E; Gross, CD. 2011. Development of primers
for improved PCR detection of the potato zebra chip pathogen, ‘Candidatus
Liberibacter solanacearum’. Plant Disease. 95. (12). 1542-1546p. RavindranALevyJPiersonEGrossCDDevelopment of primers
for improved PCR detection of the potato zebra chip pathogen, ‘Candidatus
Liberibacter solanacearum’Plant Disease2011951215421546Ravindran, A; Levy, J; Pierson, E; Gross, DC. 2012. Development of a
loop-mediated isothermal amplification procedure as a sensitive and rapid
method for detection of ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’ in potatoes
and psyllids. Phytopathology. 102. (9). 899-907p. RavindranALevyJPiersonEGrossDCDevelopment of a
loop-mediated isothermal amplification procedure as a sensitive and rapid
method for detection of ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’ in potatoes
and psyllidsPhytopathology.20121029899907Rubio, COA; Almeyda, LIH; Cadena, HMA; Lobato, SR. 2011. Relacion entre
Bactericera cockerelli y la presencia de Candidatus psyllaurous en lotes
comerciales de papa. Revista México ciencia agrícola. 2. (1). RubioCOAAlmeydaLIHCadenaHMALobatoSRRelacion entre
Bactericera cockerelli y la presencia de Candidatus psyllaurous en lotes
comerciales de papa.Revista México ciencia agrícola.201121Secor, GA; Rivera, VV; Abad, JA; Lee, I-M; Clover, GRG; Liefting, LW; Li, X;
De Boer, SH. 2009. Association of ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’ with
zebra chip disease of potato established by graft and psyllid transmission,
electron microscopy, and PCR. Plant Disease. 93. (6). 575-583p. SecorGARiveraVVAbadJALeeI-MCloverGRGLieftingLWLiXDe BoerSHAssociation of ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’ with
zebra chip disease of potato established by graft and psyllid transmission,
electron microscopy, and PCRPlant Disease2009693575583Teresani, GR; Bertolini, E; Alfaro-Fernández, A; Martínez, C; Tanaka, FAO;
Kitajima, EW; Roselló, M; Sanjuán, S; Ferrándiz, JC; López, MM; Cambra, M;
Font, MI. 2014. Association of ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’ with a
vegetative disorder of celery in Spain and development of a real-time PCR
method for its detection. Phytopathology. 104. (8). 804-811 p. TeresaniGRBertoliniEAlfaro-FernándezAMartínezCTanakaFAOKitajimaEWRosellóMSanjuánSFerrándizJCLópezMMCambraMFontMIAssociation of ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’ with a
vegetative disorder of celery in Spain and development of a real-time PCR
method for its detection.Phytopathology20141048804811Toledo, M. 2011. Cultivo de papa: Honduras secretaria de agricultura y
ganadería dirección de ciencia y tecnología agropecuaria la esperanza (Tesis
de grado) intibuca Honduras 78p.ToledoMCultivo de papa: Honduras2011Khadhair, AH; Hiruki, C; Hwang, SF; Wang, K. 1997. Molecular identification
and relatedness of potato witches’-broom phytoplasma isolates from four
potato cultivars. Microbiol. Res. 152:281-286. KhadhairAHHirukiCHwangSFWangKMolecular identification
and relatedness of potato witches’-broom phytoplasma isolates from four
potato cultivars.Microbiol.1997152281286